Quantification de l'ARN | Microbes

Quantification de l'ARN

La quantification et le dosage des acides nucleiques est notamment de l'ARN est l'étape la plus importante et la plus nécessaire après l'achèvement de la pratique d'extraction des acides nucleiques ADN ou ARN . L'analyse qualitative et quantitative de l'extraction de l'ARN peut être prédite par spectrophotométrie UV-Vis (Nannodrop) ou par électrophorèse sur gel d'agarose.

Spectrophotometre ( NanoDrop)

La méthode traditionnelle d'évaluation de la concentration et de la pureté de l'ARN est la spectroscopie UV-Vis. Dans cette technique, l'absorbance d'un échantillon d'ARN dilué est mesurée à 260 et 280 nm, et la concentration en acide nucléique est calculée à l'aide de la loi de Beer-Lambert.

Loi de beer-lambert

Où,

1. A = absorbance à une longueur d'onde particulière
2. C = concentration d'acide nucléique
3. I = trajet de la cuvette du spectrophotomètre
4. ε = le coefficient d'extinction [ε pour l'ARN est de 0,025 (mg/ml)^-1cm-1.

Conditionnement de dosage des acides nucleiques

En utilisant cette équation, une lecture A260 de 1,0 équivaut à ~ 40 µg/ml d'ARNs. Le rapport A260/A280 est utilisé pour accéder à la pureté de l'ARN. Un rapport "A260/280" de 1,8-2,1 indique un ARN hautement purifié. De plus, "A260/280" dépend à la fois du pH et de la force ionique. L'exemple de variation du rapport A260/280 est le suivant :

1. Eau traitée par DEPC (pH 5-6) =1,60 ;
2. Eau exempte de nucléase (pH 6-7) =1,85 ;
3. TE (pH 8,0) = 2,14.